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慢病毒包装Protocol大放送

发布者:艾美捷科技发布时间:2019-12-25

       慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。所以,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。

 

慢病毒(Lentivirus) 载体

 

      在细胞实验中,对于按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过使用病毒介导的方式能够大大提高基因的转导效率,达到目的基因高效表达的目的。

 

       具体来说,慢病毒包装主要应用于以下几个方面:

       1、对于难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,极大地方便了RNAi,cDNA克隆以及报告基因的研究;

       2、进行稳转细胞株的筛选;

       3、为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液;

 

慢病毒包装应用

 

       为产生高滴度的病毒颗粒,通常需要利用慢病毒表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装。慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息,慢病毒包装质粒可提供所有的转录、包装、重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中。离心收集上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞后,在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。

 

慢病毒表达载体

 

       慢病毒包装实验方法


 

 
 

        1.构建含有目的基因的慢病毒表达载体(

        2.细胞准备:细胞传代后,密度达到70%左右时进行转染;

        3.转染复合物制备:取两个EP管,一个(A管)加入慢病毒载体的表达质粒、混合包装质粒和Opti-MEMI;另一个(B管)加入Opti-MEMI、转染试剂,一边轻柔涡旋A管,一边往A管滴加B管的溶液。溶液混合后,室温放置10-25分钟,即完成转染复合物的制备。

        4.细胞转染:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;

        5.收集病毒:转染后48h、72h收集含慢病毒的上清;

 

      慢病毒包装及检测工具:

 

货号 名称 特点 规格
Lenti-Pac™ 293Ta cell line
慢病毒包装工具细胞293Ta
冻存低温 1.5 x 106 cells
LT001 Lenti-Pac™ HIV expression packaging kit
Lenti-Pac™慢病毒包装试剂盒
含优化的慢病毒包装质粒、高效转染试剂和专利滴度增强配方 20rxns
LT002 40rxns
LT003 5rxns
LT007 Lenti-Pac™ Lentivirus Concentration Solution 慢病毒浓缩试剂盒 操作简单、甩掉复杂操作或者复杂仪器,普通离心机+简单几步即可完成 50 ml
LT005 Lenti-Pac HIV qRT-PCR Titration Kit
慢病毒滴度检测试剂盒
利用qPCR法快速、简便测定慢病毒拷贝数 20次RT+50次qPCR
LT006 40次RT+100次qPCR

 

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